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          研域小課堂:關于細胞傳代方法您做對了嗎?

          發(fā)布時間: 2019-09-05  點擊次數(shù): 1598次

          經過自主研發(fā)和兼并重組不斷擴展企業(yè)產品線,逐步發(fā)展為試劑的專業(yè)制造商和電子商務集成供應商,成為試劑職業(yè)發(fā)展的者。在開始細胞傳代前,仔細檢查細胞傳代所需的儀器和試劑是否齊全。

          一:細胞與試劑方面:

          1、細胞(單層細胞,鏡檢合適)

          2、培養(yǎng)液(MEM-0.2%LH 培養(yǎng)液或MEM 培養(yǎng)液或199 等合適細胞有要求的培養(yǎng)液)

          3、滅活小牛血清、慶大霉素溶液(1 萬單位)

          4、7.5%NaHC03 溶液
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          5、0.25%胰蛋白酶

          6、 PBS 洗液。

          二;試驗小用具方面:

          1、小方瓶(100m1)

          2、克氏瓶

          3、膠塞

          4、吸管(10ml、1m1)

          5、細胞吹打管(20 ml)(以上用具需經121℃至少15 分鐘高壓滅菌)

          6、C02 孵箱

          7、超凈臺

          8、倒置顯微鏡

          9、4℃、- 20℃冰箱
           
          三:細胞傳代的操作過程

          1、挑選細胞:鏡檢細胞,挑選成長狀態(tài)杰出,細胞界限清晰,具有立體感,形狀好無污染、無反常及可疑病變細胞。

          2、制造細胞培養(yǎng)液:按以下配比制造MEM-0.2%LH 培養(yǎng)液100ml 內,參加滅活小牛血清10m1,慶大霉素溶液0.3m1,7.5%碳酸氫鈉溶液3ml。(僅供一般參考)。

          3、消化細胞:先用PBS 洗液沖刷細胞外表1-2 次,每次10m1,棄去洗液,向細胞瓶內參加0.25%胰蛋白酶溶液,每瓶1m1,細胞瓶平放,使消化液*覆蓋細胞外表。

          4、至細胞*脫落到胰酶中:每瓶參加10m1 細胞培養(yǎng)液吹打渙散細胞,按所需的傳代比例分裝于小方瓶(100m1)中,再參加10m1 細胞培養(yǎng)液重復吹打一次后分裝,然后補加至所需培養(yǎng)量。

          5、加塞,置于37±1℃孵箱培養(yǎng)。約2~4 天成片(由細胞接種濃度決定)。

          6、填寫傳代記錄。

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